产品货号：
BTN13-99047YD
中文名称：
川贝母鉴定试剂盒(PCR-RFLP药典法)
英文名称：
Bulbus Fritillariae cirrhosae PCR-RFLP Kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品是根据《中国药典》收录的PCR-RFLP法开发的专门用于川贝母研究鉴定的试剂盒。
保存：-20℃，有效期2年。
引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、样品DNA的制备
二、设置PCR反应
三、电泳检测
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川贝母(Bulbus Fritillariae cirrhosae)是百合科贝母属的川贝母、甘肃贝母、暗紫贝母、瓦布贝母、梭砂贝母和太白贝母6种贝母的干燥鳞茎，有化痰止咳、清热润肺、散结消痈之功效。由于川贝母的药用价值高、疗效显著、市场需求量大，故常有用5种其他贝母(如浙贝母、平贝母、伊贝母、湖北贝母等)混充川贝母的现象，因此精准检测川贝母真假具有重要意义。目前川贝母鉴定最常且最准确的由2015年版《中国药典》收录的PCR-RFLP法，该方法为PCR后再进行酶切电泳分析。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性实验。
- 特异性高，引物是根据川贝母DNA高度保守区设计，生物信息学分析发现它只能检测川贝母，不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
- 本制品足够50次20μL体系的常规PCR反应。
- 本制品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×PCR MasterMix | 500μL |
| 川贝母PCR引物干粉 | 50T |
| 川贝母PCR阳性对照(104拷贝/μL) | 250μL |
| Sma I(10U/μL) | 50μL |
| 10×酶切缓冲液 | 100μL |
保存：-20℃，有效期2年。
引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照(104拷贝/μL，本试剂盒提供)10μL加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样)。可以直接用水作为制备的阴性对照。
- 用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。
二、设置PCR反应
- 标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成分 N+2个
样品管PCR
阴性对照PCR
阳性对照2×PCR MasterMix 各10μL 10μL 10μL 川贝母PCR引物混合液 各2μL 2μL 2μL N+2个样品DNA模板 各8μL - - PCR阴性对照(水) - 8μL - 川贝母PCR阳性对照(104拷贝/μL) - - 8μL - 按下表设置PCR反应：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5min PCR反应
(35个循环)95℃ 30sec 55～58℃ 30sec 72℃ 30sec 最后延伸 72℃ 5min - 取上述PCR反应液，进行酶切反应。按照下表在各管中加入下列成分：
成分 用量 10×酶切缓冲液 2μL Sma I(10U/μL) 0.5μL 上述PCR反应液 6μL 水 11.5μL - 30℃水浴酶切反应2小时。
三、电泳检测
- 取8μL酶切产物进行常规琼脂糖电泳检测，由于酶切产物较短，建议用1.5%的琼脂糖凝胶。
- 供试品凝胶电泳图谱中，在与川贝母阳性对照图谱相应的位置上，在100～250bp应有两条DNA条带，空白对照无条带。
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